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CAR-T細胞療法已經(jīng)在血液惡性腫瘤中顯示出令人印象深刻的療效。去年，美國FDA批準(zhǔn)了兩種靶向CD19的CAR-T細胞療法，諾華的tisagenlecleucel（Kymriah™）用于白血病（2017年8月）和淋巴瘤（2018年5月），以及Kite Pharma的axicabtagene ciloleucel（Yescarta™）用于淋巴瘤（2017年10月）。
這也推動了在實體瘤中誘導(dǎo)相似功效的CAR的發(fā)展。然而，該過程在實現(xiàn)足夠的功效之前，還面臨著多個必須解決的挑戰(zhàn)：
在實體瘤中CAR-T細胞治療的眾多挑戰(zhàn)中，一個主要障礙是缺乏真正的腫瘤特異性靶抗原，這迫使細胞免疫學(xué)家靶向在腫瘤上過表達的腫瘤相關(guān)抗原（tumor-associated antigens, TAAs），但由于TAA也在正常組織和器官表達，具有安全風(fēng)險。
此外，實體瘤的腫瘤微環(huán)境（tumor microenvironment, TME）特別是免疫抑制劑，阻止有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答。免疫抑制性TME含有多種成分，包括物理屏障，如致密的細胞外基質(zhì)；功能失調(diào)的上皮細胞；代謝檢查點，如缺氧；免疫屏障，如免疫抑制細胞因子/分子和免疫抑制性免疫細胞。
近日，CAR-T領(lǐng)域“大牛”賓夕法尼亞大學(xué)的Carl June教授在Frontiers in Immunology上發(fā)表了綜述，針對目前CAR-T細胞治療實體瘤的嚴(yán)峻形勢，指出：為了有效地靶向?qū)嶓w瘤，必須同時解決影響功效和毒性的多種因素，深入了解CAR-T細胞生物學(xué)和影響CAR-T細胞療法治療窗的多種因素。
Carl June教授（圖片來源：Philadelphia Magazine）
在這篇綜述中，Carl June等人總結(jié)了CAR抗原識別機制的新發(fā)現(xiàn)，還討論了調(diào)整和擴展治療窗，使CAR-T細胞有效且安全地靶向?qū)嶓w瘤的合理策略。
或許，能給正在實體瘤CAR-T細胞療法中掙扎的你一些有用的信息。
CAR-T細胞生物學(xué)基礎(chǔ)知識
雖然已經(jīng)深入研究了T細胞通過TCR與靶標(biāo)相互作用的基本機制，但CAR與靶標(biāo)相互作用的機制尚不清楚。CAR由TCR復(fù)合物和抗體的組合部分組成，因此討論CAR與內(nèi)源性、未修飾的TCR-T細胞的相似性，以及定義CAR的明顯差異能更好地理解CAR-T細胞生物學(xué)。
CAR-T和TCR-T細胞生物學(xué)因素的比較
TCR與CAR的結(jié)構(gòu)對比（圖片來源：Science）
>>>>TCR
由TCRα和TCRβ亞基組成的異二聚體。每個亞基含有可變區(qū)結(jié)構(gòu)域（V）和恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域（C），其后是跨膜區(qū)。每個V結(jié)構(gòu)域含有三個互補決定區(qū)（CDR），其與主要組織相容性復(fù)合物（MHC）上呈遞的肽相互作用。
TCR本身不具有信號結(jié)構(gòu)域，需要由CD3復(fù)合物啟動細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)。CD3復(fù)合物由三個二聚體組成，分別是CD3ζε、CD3δε異二聚體和CD3ζζ同二聚體。
>>>>CAR
合成的嵌合蛋白，被引入T細胞以重定向抗原特異性并增強細胞功能。通常地，CAR由來自mAb的單鏈可變片段（scFv）、細胞外間隔區(qū)（稱為鉸鏈）、跨膜結(jié)構(gòu)域、CD3ζ信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和通常一或兩個（第二代或第三代）共刺激結(jié)構(gòu)域組成。
非典型構(gòu)建的CAR利用受體配體或肽作為細胞外抗原識別結(jié)構(gòu)域，例如zetakine CAR：白細胞介素-13受體α2（IL13Rα2）zetakine CAR。
CAR賦予T細胞以不依賴于MHC的方式通過scFv（抗體識別）直接結(jié)合表面抗原的益處。CAR可以通過CD3ζ和共刺激結(jié)構(gòu)域同時向T細胞傳遞信號，這可以誘導(dǎo)T細胞的化學(xué)計算的和潛在理想的活化。
CAR如何觸發(fā)免疫突觸形成和傳遞信號？
通過TCR和CAR形成免疫突觸
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TCR IS
T細胞活化是通過TCR與MHC-肽復(fù)合物（稱為IS）的高度有組織的和動態(tài)的相互作用介導(dǎo)的。成熟的IS是基于TCR信號的聚集體，誘導(dǎo)T細胞應(yīng)答。
IS由三個同心的聚集分子環(huán)組成（圖A）：
IS的內(nèi)環(huán)被稱為中心超分子激活簇（cSMAC），其中發(fā)生TCR信號傳導(dǎo)。cSMAC含有大多數(shù)TCR-MHC-肽復(fù)合物、CD28、PKC-θ和Lck；
外周SMAC（pSMAC）含有參與細胞粘附的蛋白質(zhì)，例如整聯(lián)蛋白LFA-1、細胞骨架連接子talin和ICAM1；
大分子，如CD43和CD45，被排除在pSMAC之外，構(gòu)成遠端SMAC（dSMAC）；
裂解顆粒的分泌發(fā)生在細胞毒性T淋巴細胞（CTL）和靶細胞之間的IS變體（即分泌性突觸）內(nèi)。分泌性突觸在cSMAC中具有兩個獨立且不同的結(jié)構(gòu)域：（1）包含信號蛋白的信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；（2）與細胞因子、穿孔素和顆粒酶的胞吐作用有關(guān)的分泌結(jié)構(gòu)域。Stinchcombe等人證明，由Lck信號控制的瞬時極化和中心體對質(zhì)膜的對接，在指導(dǎo)這種分泌的機制中具有重要作用。
此外，抑制和共刺激分子，如PD-1、CTLA-4和ICOS也在IS區(qū)域聚集，并在調(diào)節(jié)T細胞活化中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
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CAR IS
CAR下游的細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)和CAR形成IS的機制尚未得到廣泛研究。
已經(jīng)證明，在CD19特異性CAR-T細胞和靶細胞之間，ZAP70向IS募集以及CD45被排除在IS之外，類似于TCR活化。TCR的下游信號分子，如CD3ζ、LAT、Lck和ZAP70在CD19特異性CAR-T細胞被自體CD19+ B細胞激活后磷酸化。與第二代CAR-T細胞相比，第三代CAR-T細胞在TCR的下游信號分子上具有顯著更高的磷酸化狀態(tài)。
CAR IS（圖B）與TCR IS的結(jié)構(gòu)不同。CAR IS沒有呈現(xiàn)出系統(tǒng)性的靶眼結(jié)構(gòu)，而這是TCR IS的一個顯著特征。CAR IS肌動蛋白（Actin）環(huán)的組織性很差，并且肌動蛋白在CAR IS的中心可能不會*消失。LFA-1紊亂，CAR腫瘤抗原復(fù)合物在CAR IS的微團簇形成隨機分布。
TCR IS需要5-10分鐘來形成靶眼結(jié)構(gòu)，而CAR IS可能不需要形成這些穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，因為CAR IS的無組織多焦點模式足以快速誘導(dǎo)顯著的近端信號傳導(dǎo)，其發(fā)生在短時間內(nèi)（<2分鐘）。
IS生物學(xué)的另一個重要部分是將細胞毒性顆粒（包括穿孔素和顆粒酶）遞送至由微管組織中心（MTOC）介導(dǎo)的IS。CAR的近端信號傳導(dǎo)的快速但短暫的持續(xù)時間也誘導(dǎo)MTOC快速遷移至IS并加速顆粒的遞送。
雖然CAR IS的機制已逐漸顯現(xiàn)，但尚不清楚CAR IS結(jié)構(gòu)的差異是否與CAR-T細胞的功效相關(guān)。
可溶形式CAR的配體，如CD30、間皮素和CEA，存在于單體形式不能觸發(fā)CAR信令，因為它們不會引起CAR二聚化。然而，CAR-T細胞可能潛在地識別可以以寡聚形式存在的可溶性配體，例如TGF-β，甚至無需細胞-細胞相互作用。
CAR-T細胞識別的目標(biāo)密度閾值是多少？
為了解決CAR激活閾值的問題，Watanabe等人研究了激活CD20特異性CAR-T細胞（CD28共刺激結(jié)構(gòu)域）所需的CD20密度，其中每個靶細胞表達約200-250,000個CD20分子。在細胞內(nèi)表達低密度CD20（約200個分子/細胞）的靶細胞即可被CAR-T細胞誘導(dǎo)裂解。該數(shù)據(jù)與之前的報道一致，即CAR靶向小鼠OTS8的腫瘤特異性糖表位，其可以裂解具有相似低密度（~200分子/細胞）靶抗原的靶細胞。
Watanabe等人還證明誘導(dǎo)T細胞增殖和細胞因子產(chǎn)生所需的靶抗原密度要高于誘導(dǎo)CAR介導(dǎo)的裂解所需的靶抗原密度。
總之，CAR-T細胞可識別具有相當(dāng)?shù)退降陌锌乖陌屑毎⑶宜鼈兙哂嗅槍毎呀狻⒃鲋澈蛡€體細胞因子產(chǎn)生的分級T細胞信號傳導(dǎo)閾值。CAR構(gòu)建體的差異（例如，scFv，鉸鏈，共刺激結(jié)構(gòu)域的親和力）或CAR表達密度，可以用于更地控制CAR-T細胞活化。
CAR-T細胞是否可以作為連環(huán)殺手？
內(nèi)源性T細胞和NK細胞可以連續(xù)裂解多個靶細胞（串聯(lián)殺傷），這很可能*腫瘤所必需的。然而，直到近，CAR-T細胞介導(dǎo)連續(xù)殺傷的能力和靶細胞裂解的動力學(xué)才得到充分證實。
Davenport等人使用一種新的轉(zhuǎn)基因小鼠模型測試了通過內(nèi)源性TCR或異位表達的CAR激活的細胞毒性T淋巴細胞（CTL）的功能。他們使用定時顯微錄影術(shù)（time-lapse video microscopy）清楚地證明CAR-T細胞是連續(xù)殺手。大約22％的CAR-T細胞依次向兩個或三個腫瘤細胞遞送致死命中，并且通過CAR連續(xù)殺死的頻率與通過TCR的頻率相當(dāng)。
腫瘤細胞裂解的動力學(xué)分析表明，在前20小時內(nèi)，TCR和CAR介導(dǎo)等效的裂解動力學(xué)。但與20小時后TCR介導(dǎo)的裂解相比，CAR介導(dǎo)的細胞裂解動力學(xué)減慢。這種差異可以通過在抗原識別刺激后的CAR下調(diào)來解釋，這可以通過基于TCR的CAR表達來改善。
CAR親和力如何影響T細胞功能？
T細胞活化受TCR和MHC-肽復(fù)合物之間相互作用的調(diào)節(jié)，并且影響活化敏感性的主要因素是靶抗原密度和TCR親和力。在微環(huán)境中腫瘤的主要免疫抑制機制是抗原識別失敗，原因是低親和力的TCR和癌癥相關(guān)的肽-MHC復(fù)合物的相互作用。
TCR對自身衍生肽（如腫瘤抗原）的親和力低于TCR對病原體衍生抗原的親和力。因此，通常更難以分離對TAA具有足夠敏感性的T細胞，這是過繼性細胞療法（ACT）的個障礙。
另一方面，TCR的高親和力伴隨著自身免疫應(yīng)答，當(dāng)患者接受ACT治療時，有時會導(dǎo)致嚴(yán)重的不良事件。已經(jīng)報道，ACT利用超生理的、高親和力的TCR不能提高療效，反而MHC-肽復(fù)合物的數(shù)量少能夠?qū)崿F(xiàn)高TCR占用，原因是單個復(fù)合體可以串聯(lián)接合并觸發(fā)數(shù)百個TCR。
總之，這表明一種模型，其中TCR的理想親和力應(yīng)提供足夠長時間的相互作用來實現(xiàn)近端信號的傳導(dǎo)，但也應(yīng)適當(dāng)?shù)亟档陀H和力，以分離并允許盡可能多的TCR遇到MHC-肽復(fù)合物。
scFv親和力對CAR-T細胞功能反應(yīng)的影響仍未*了解。通常，與天然TCR親和力相比，用scFv構(gòu)建的CAR具有更高的親和力。由于大多數(shù)TAA在腫瘤上高表達，在正常組織中低表達，增加CAR的親和力將可能導(dǎo)致on-target/off-tumor效應(yīng)引起的嚴(yán)重不利影響的風(fēng)險，因此必須考慮刺激閾值以獲得CAR-T細胞活化的*特異性。
與天然T細胞類似，CAR-T細胞也可以以連續(xù)方式殺死多個靶細胞。當(dāng)通過CAR刺激而不是通過TCR刺激腫瘤細胞時，可以更快地消除腫瘤細胞，因為CAR可以比TCR更快地從垂死的腫瘤細胞中解離出來。因此，增加CAR-T細胞的親和力可能減少/防止連續(xù)殺傷，促進T細胞衰竭，并減少中樞記憶和效應(yīng)表型T細胞的產(chǎn)生和持久性，或通過激活誘導(dǎo)細胞死亡來增加T細胞的損失等一系列不利影響。
實體瘤靶抗原的篩選
ACT的關(guān)鍵是選擇靶抗原，以提供足夠的功效并使毒性小化。一些針對腫瘤特異性抗原的CAR已在臨床前開發(fā)當(dāng)中，包括針對異常糖基化癌基因的CAR，如MUC1的Tn糖型，以及腫瘤特異性活化形式的整合素，以及臨床上，如CARs靶向膠質(zhì)母細胞瘤中的腫瘤特異性轉(zhuǎn)錄變體EGFRvIII。
在沒有更多腫瘤特異性靶標(biāo)的情況下，CAR-T細胞療法很可能選擇繼續(xù)靶向在正常組織中也表達的實體瘤TAA。實際上，大多數(shù)正在進行的針對實體瘤的CAR-T細胞療法的臨床試驗都針對這樣的TAA。
了解正常組織是否表達抗原及其表達水平以預(yù)測潛在毒性至關(guān)重要。
基于基因表達（RNA測序或微陣列）或免疫組織化學(xué)（IHC），可獲得正常組織上抗原表達的幾個公共數(shù)據(jù)庫。但是，這些技術(shù)包含限制和陷阱。對于基因表達分析，非常罕見但關(guān)鍵細胞表達的抗原可能被低估。此外，可能無法區(qū)分表達的基因是來自組織還是來自浸潤細胞。此外，假陽性和假陰性是尚未解決的問題，IHC對低表達抗原的敏感性可能不足以選擇實體瘤的CAR靶標(biāo)。
新技術(shù)，如單細胞RNA測序，可以提供更準(zhǔn)確的表達譜，使研究人員能夠更好地預(yù)測新型CAR-T細胞的功效和毒性。
擴大CAR-T細胞療法治療窗的策略
“治療窗”是藥物毒理學(xué)的術(shù)語，定義為功效和毒性之間的一系列劑量，實現(xiàn)高治療益處并且不會導(dǎo)致不可接受的毒性。盡管工程化細胞與傳統(tǒng)藥物的藥代動力學(xué)大不相同，但將治療窗的概念應(yīng)用于ACT領(lǐng)域?qū)τ趦?yōu)化治療方法將是有價值的。
圖解說明CAR-T細胞療法的治療窗
圖A：小有效劑量（MED）和大耐受劑量（MTD）之間的范圍；
圖B：在CAR-T細胞療法中，僅在腫瘤細胞上表達的靶向抗原或僅在非關(guān)鍵組織上表達的抗原擴大了治療窗，因為不會對重要組織產(chǎn)生直接毒性；
圖C：靶向在關(guān)鍵正常組織/細胞中表達的抗原通過降低MTD使治療窗變窄。
不能僅基于抗原表達譜來解決治療窗的確定。例如，即使在腫瘤和正常組織的抗原表達差異很大的情況下，其中抗原在腫瘤中以較高密度表達，但由于內(nèi)在的免疫抑制，腫瘤可能仍然比正常組織對CAR-T細胞更具抗性。正常組織中不存在的TME。在這種情況下，腫瘤抑制T細胞浸潤或誘導(dǎo)T細胞功能減退將通過增加MED來縮小CAR-T細胞的治療窗。
鑒于真正的腫瘤特異性靶表面抗原尚未被發(fā)現(xiàn)，TAA可能是我們在可預(yù)見的未來的合理目標(biāo)，因此，對于實體瘤的治療，制定擴大CAR-T細胞療法治療窗的策略是必須的。
擴大治療窗的可能方法包括：（1）優(yōu)化CAR密度、親和力和感應(yīng)；（2）優(yōu)化免疫突觸形成；（3）聯(lián)合治療；（4）CAR-T細胞和治療劑的局部遞送；（5）誘導(dǎo)靶抗原表達；（6）其他修飾。
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優(yōu)化CAR密度、親和力和感應(yīng)
盡管增加CAR親和力使得能夠識別與靶密度無關(guān)的抗原，但該作用可能引起嚴(yán)重的副作用，即on-target/off-tumor毒性，并降低連續(xù)殺傷靶腫瘤的能力。
因此，重要的是要制定合理的策略，以確定理想的CAR親和力。
使用輕鏈交換技術(shù)構(gòu)建親和調(diào)節(jié)的scFv是測量CAR的*親和力的可行方法之一。報道表明，CAR-T細胞的親和力高于確定閾值不一定是必需的，或者更重要的是，通過產(chǎn)生對同一表位具有不同親和力的CAR，并鑒定這些表位特異性CAR-T細胞表現(xiàn)出大的細胞裂解、增殖和安全潛力的低親和力。
除了改變scFv親和力外，調(diào)節(jié)表面CAR表達水平是誘導(dǎo)理想CAR信號傳導(dǎo)的重要因素。CAR-T細胞功能受CAR密度和靶抗原密度控制，其中任一個的低表達都可導(dǎo)致CAR-T細胞的功能和靈敏度有限。
另一方面，CAR結(jié)構(gòu)和高CAR密度可能導(dǎo)致產(chǎn)生CAR的連續(xù)信號傳導(dǎo)（強直信號），然后通過增加T細胞分化、耗竭和活化誘導(dǎo)的細胞死亡（AICD）而誘導(dǎo)較差的抗腫瘤作用和T細胞的體內(nèi)植入。因此，改善CAR密度同時保持表達低于強直信號誘導(dǎo)所需的閾值，可以誘導(dǎo)足夠的抗腫瘤功效并保持對每種靶抗原和CAR構(gòu)建體的安全潛力。
此外，可以通過腫瘤細胞上的兩種不同抗原識別組合抗原。（1）“AND”邏輯門控CAR：僅在同時識別兩種單獨的所需抗原時才能*地激活CAR-T細胞。（2）“OR”邏輯門控CAR：CAR-T細胞通過表達兩個CAR或具有串聯(lián)抗原結(jié)合域的單個CAR，識別兩種不同抗原中的任一種來驅(qū)動*信號傳導(dǎo)。其中，“AND”邏輯CAR的工程T細胞能夠?qū)崿F(xiàn)更具特異性和更安全的靶向，“OR”邏輯CAR有潛力克服由于靶抗原丟失而導(dǎo)致的低靶抗原表達和腫瘤逃逸。
另一個有吸引力的平臺是使用銜接分子開發(fā)“通用”CAR，以克服抗原表達中的腫瘤異質(zhì)性并使CAR-T細胞的活化更具條件性。該平臺轉(zhuǎn)化為臨床的一個潛在問題是銜接分子的免疫原性。
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優(yōu)化免疫突觸形成
如上所述，與組織性良好的TCR IS的靶眼結(jié)構(gòu)相比，CAR IS更加雜亂，并且其特征在于Lck排列的多焦點模式、肌動蛋白環(huán)減少和LFA-1擴散分布。與TCR IS相比，CAR IS的顯著能力實際上是即時誘導(dǎo)近端信號傳導(dǎo)和細胞毒性顆粒的快速遞送，其由MTOC向CAR IS的更快遷移介導(dǎo)。這些優(yōu)勢使CAR-T細胞能夠快速從破壞的腫瘤細胞中解離，并介導(dǎo)有效的連續(xù)殺傷。
近，一些研究報告了關(guān)于CAR設(shè)計如何影響IS形成的重要發(fā)現(xiàn)。有研究使用由CD28或4-1BB共刺激結(jié)構(gòu)域構(gòu)建的CD19特異性CAR檢測CAR IS質(zhì)量，并確定CD28加4-1BB的第三代CAR優(yōu)于基于CD28的第二代CAR，包括IS的結(jié)構(gòu)、信號和功能。與雙特異性CAR-T細胞相比，對兩種神經(jīng)膠質(zhì)瘤相關(guān)抗原HER2和IL13Rα2特異的CAR表現(xiàn)出顯著更高的F-肌動蛋白積累和MTOC極化得增加。
CAR IS的結(jié)構(gòu)特征現(xiàn)在正在闡明當(dāng)中，其調(diào)節(jié)將是CAR-T細胞治療的一個很好的選擇。已經(jīng)有幾種通過免疫調(diào)節(jié)藥物（IMiDS）改善CAR IS的嘗試，例如來那度胺-沙利度胺的合成衍生物。來那度胺通過增加肌動蛋白的積累提高了CAR功效，是一種有潛力增強CAR活性的聯(lián)合療法。
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聯(lián)合療法
聯(lián)合療法是一種通過克服腫瘤異質(zhì)性和擴大治療窗來推動CAR-T細胞治療實體瘤的有希望的策略。
溶瘤病毒（OVs）是用于治療實體瘤的有希望的藥劑。OV特異性地靶向腫瘤細胞，同時對正常細胞不起作用，促使直接的腫瘤溶解，并激活免疫系統(tǒng)。此外，還可對OV進行基因修飾，使其在TME中選擇性地表達治療性轉(zhuǎn)基因。OV在局部表達治療性轉(zhuǎn)基因的同時恢復(fù)抗腫瘤免疫反應(yīng)的能力提供了與CAR-T細胞療法組合的合理理由。
其他組合方法包括與對4-1BB共刺激受體特異的激動性抗體組合，其可以直接激活CAR-T細胞并且還可以減少宿主免疫抑制性免疫細胞，例如Tregs或MDSC。
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CAR-T細胞和治療劑的局部遞送
CAR-T細胞的全身性遞送可能會受到對實體瘤的可及性的限制，還涉及安全性問題。因此，直接施用（局部給藥）到腫瘤部位中是CAR-T細胞遞送的一種解決方法。另一種方法是設(shè)計CAR-T細胞僅在腫瘤部位或主要在腫瘤部位起作用。
為了克服免疫TME，細胞因子和趨化因子，如IL-18、IL-12的局部遞送，CCL19和IL-7的結(jié)合或表達檢查點阻斷劑的CAR-T細胞，可以幫助克服TME對T細胞浸潤和功能的阻礙。臨床前模型中已經(jīng)證明了這些方法具有增強的治療功效，同時能避免全身不良事件。
>>>>靶抗原表達的誘導(dǎo)
正如之前說的，靶抗原密度可以控制CAR-T細胞療法的功效。
此外，靶抗原的丟失或下調(diào)是腫瘤逃逸的主要原因。靶細胞上抗原表達的誘導(dǎo)或再誘導(dǎo)可能是擴大治療窗的有吸引力的方法。
據(jù)報道，亞致死劑量的輻射可誘導(dǎo)腫瘤細胞上TAA（如間皮素和CEA）的表達。此外，表觀遺傳控制也可以調(diào)節(jié)靶抗原表達，例如，抗甲基化藥物氮雜胞苷（5-AZA）可以在治療后重新誘導(dǎo)淋巴瘤細胞上的CD20表達，包括用靶向CD20的利妥昔單抗治療后。
>>>>其他修飾
CAR-T細胞裝備zi殺系統(tǒng)，例如誘導(dǎo)型caspase-9 （iCas9）或共表達截短的EGFR，將加強CAR-T細胞的安全性。這些系統(tǒng)可以通過施用相關(guān)藥劑引發(fā)細胞固有細胞凋亡或細胞外源性抗體介導(dǎo)的細胞耗竭，從而誘導(dǎo)CAR-T細胞的消耗。
可誘導(dǎo)的CAR系統(tǒng)，包括TET誘導(dǎo)系統(tǒng)，它能夠使用藥物誘導(dǎo)控制CAR表達。
合成的Notch系統(tǒng)（synNotch）為CAR-T細胞的多樣化和靈活性提供了另一個有吸引力的平臺。SynNotch受體可以允許在抗原識別時向T細胞添加定制應(yīng)答程序。 例如，synNotch可以在識別抗原時驅(qū)動定制的細胞因子分泌，偏向性的T細胞分化，或局部遞送治療有效載荷，如抗體。
結(jié)語
CAR-T細胞治療實體瘤是復(fù)雜且多因素的，具有比用于治療B細胞白血病和非霍奇金淋巴瘤的CD19靶向更窄的治療窗。
盡管臨床研究越來越多，但除了腦室內(nèi)遞送IL13Rα2CAR的膠質(zhì)母細胞瘤外，很少有明顯的療效。在這種情況下，建立擴大治療窗的策略顯得至關(guān)重要。
腫瘤生物學(xué)、TME和CAR-T細胞生物學(xué)仍有許多未知數(shù)。幸運的是，解決這些問題的強大工具，如生物信息學(xué)、質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)、大規(guī)模細胞計數(shù)和單細胞RNA測序等新興技術(shù)，將使我們能夠獲得有關(guān)腫瘤、TME組分和免疫細胞的信息。
此外，基因編輯技術(shù)的成熟，例如CRISPR / Cas9系統(tǒng)，或合成生物學(xué)，例如synNotch系統(tǒng)，將能夠幫助靈活地設(shè)計T細胞，有利于CAR-T細胞治療實體瘤的突破。
當(dāng)向患者施用新的CAR-T細胞療法時，已經(jīng)報道了幾個具有意外嚴(yán)重毒性的病例。不幸的是，目前的技術(shù)不允許我們預(yù)測臨床環(huán)境中的所有毒性。因此，目前只有臨床試驗可以揭示ACT的安全性和有效性信息。未來，持續(xù)開發(fā)和改進可以預(yù)測毒性的臨床前模型，以及合理規(guī)劃和實施臨床試驗，對于CAR-T細胞療法的進一步發(fā)展至關(guān)重要。
參考出處：
frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2018.02486/ful
science.sciencemag.org/content/359/6382/1361/tab-figures-data
13916499749
